试剂盒采用双一步夹心法酶联吸附试验(ELISA)。往预先包被白蛋白(ALB)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
5.弃去,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
绘制曲线:在Excel工作表中,以品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
ELISA:本法主要用于检测IgM。由于IgM出现于感染早期,所以检测出IgM,则可作为某种的早期诊断。ELISA根据所用标记不同可分为标记抗原、标记、标记抗ELISA等几种,其中以标记抗原ELISA比较有代表性,该的主要程序为:① 用抗u链(抗IgM重链)包被→37℃ 60分钟后置4℃过夜,洗涤三次、抛干② 加待检 → 37℃ 2小时,洗涤三次、抛干③ 加酶标抗原 → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干④ 加底物液 → 37℃ 20分钟,加终止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。